因此定量檢測(cè)hk2的含量，在骨巨細(xì)胞瘤經(jīng)過過表達(dá)、沉默后的絕對(duì)數(shù)量，是檢測(cè)hk2在骨巨細(xì)胞瘤發(fā)展過程中作用的一個(gè)定量證據(jù)。

    westernblot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。

    經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分……

    原理聽起來頗為復(fù)雜，但其實(shí)真正要操作的時(shí)候，主要的步驟主要是以下幾步。

    試劑準(zhǔn)備，也就是讓蛋白質(zhì)跑的跑道，需要聚丙烯酰胺凝膠電泳來提供。

    然后是參賽的運(yùn)動(dòng)員，是把腫瘤細(xì)胞裂解之后，使得內(nèi)部的蛋白質(zhì)充分釋放，然后制作了標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    制作標(biāo)準(zhǔn)曲線之后，就可以讓自己處理的細(xì)胞產(chǎn)生的‘運(yùn)動(dòng)員’開始上賽道了。

    緊接著是電泳、轉(zhuǎn)模、免疫反應(yīng)、顯影等等一系列后，通過特殊的抗體和試劑，就能夠顯示目標(biāo)蛋白的膠片。將膠片進(jìn)行掃描或拍照，用凝膠圖象處理系統(tǒng)分析目標(biāo)帶的分子量和凈光密度值……

    這個(gè)過程很復(fù)雜，也相對(duì)漫長(zhǎng)，更需要耐心。

    不過，方子業(yè)反正已經(jīng)下了門診，來到實(shí)驗(yàn)室里，就一步一步地按部就班來做。且旁邊還有洛聽竹幫點(diǎn)小忙。

    最后呈現(xiàn)出結(jié)果后，洛聽竹欣喜異常：“方師兄，你今天這個(gè)條帶顯示很清楚欸，上一次范師兄跑出來的是啞鈴狀的?！?br/>
    說完，她偏頭看向方子業(yè)的成片，條帶清晰、沒有雜帶、背景干凈！

    “呈啞鈴狀一般配置膠有問題，另外還有一種可能是樣品中含有太多雜質(zhì)，沒有離心下來，然后雜質(zhì)沉積在孔的中間，蛋白自然被推擠到兩邊?！?br/>
    “配好膠，不合格的堅(jiān)決不用，不要鋌而走險(xiǎn)?！狈阶訕I(yè)仔細(xì)想了一下原理，如此給洛聽竹解釋。

    “那如果有條帶拖尾呢？”洛聽竹想了一下，又問了一個(gè)問題，應(yīng)該是她跟著別人做的時(shí)候，看到過這樣的情況。

    “條帶拖尾的話，一般是蛋白量濃度高或者，孵一抗?jié)舛群蜁r(shí)間太長(zhǎng)?！?br/>
    “蛋白含量高的話，可能是前期的文獻(xiàn)準(zhǔn)備沒有確定好，我認(rèn)為最有可能的是因?yàn)橐豢節(jié)舛忍?，作用時(shí)間太長(zhǎng)引起?！?br/>